①當溫度升高時，增加了微生物細胞原生質膜的通透件，甚至會對膜造成損傷，使滅菌劑更簡單進入作用部位；
②溫度升高，滅菌劑的穿透才能增強，分散速度加速，便于敏捷經過障礙，到達作用部位；
③溫度升高有利于在作用點上的滅菌劑與菌體代謝中心產物之間的生物化學反應，加速了滅菌劑效力的發揮。
已有試驗證明，苯酚對副傷寒桿菌的滅菌力，溫度每增加 10℃，滅菌力增強23倍。
(2)pH 值
①對微生物影響外界PH值的改變，可使微生物細胞壁或原生質膜的結構發生改變，然后影響了膜的通透性，使滅菌劑更難或更易到達作用部位。
②對滅菌劑活性的影響PH值對許多滅菌劑的抗菌性能影響很大：一些有機酸類防腐劑如苯甲酸、山梨酸、脫氫醋酸等是以分子方式起抑菌作用的，它們在pH≥7時會離解成負離子，失去抑菌活性；季銨鹽類滅菌劑，在堿性介質中有高的抑菌活性，而在值低時，抑菌活性很小；當PH值從5增到8時，布羅波爾的 M1C值從6,25mg/kg增加到10-25 mg/kg;凱松在PH>8的情況下易分解失去活性。
(3)溫度
①某些氣體滅菌劑的作用受環境相對濕度的影響，如環氧乙烷，相對濕度越高，滅菌作用越差。
②水分活度（AW）是表示維護對象中的水可被微生物使用的程度。每種資料均有一定的aw值，下降資料的Aw值，對滅菌劑的作用是有利的。反之，若aw值很大，也可值滅菌劑損失其應有的維護作用。